उत्पादों
2019-nCoV के लिए Lifecosm SARS-Cov-2-RT-PCR डिटेक्शन किट
अपेक्षित उपयोग
इस किट का उपयोग नए कोरोनोवायरस (2019-nCoV) के गले की सूजन, नासॉफिरिन्जियल स्वैब, ब्रोन्कोएल्वियोलर लवेज द्रव, थूक का उपयोग करके गुणात्मक पता लगाने के लिए किया जाता है। इस उत्पाद का पता लगाने का परिणाम केवल नैदानिक संदर्भ के लिए है, और इसे केवल के रूप में उपयोग नहीं किया जाना चाहिए। नैदानिक निदान और उपचार के लिए साक्ष्य। रोगी की नैदानिक अभिव्यक्तियों और अन्य प्रयोगशाला परीक्षणों के संयोजन में स्थिति के व्यापक विश्लेषण की सिफारिश की जाती है।
निरीक्षण सिद्धांत
किट वन-स्टेप आरटी-पीसीआर तकनीक पर आधारित है।वास्तव में, 2019 के नए कोरोनावायरस (2019-nCoV) ORF1ab और N जीन को प्रवर्धन लक्ष्य क्षेत्रों के रूप में चुना गया था।विशिष्ट प्राइमर और फ्लोरोसेंट जांच (एन जीन जांच को एफएएम के साथ लेबल किया जाता है और ओआरएफ1एबी जांच को एचईएक्स के साथ लेबल किया जाता है) को नमूनों में 2019 नए प्रकार के कोरोनावायरस आरएनए का पता लगाने के लिए डिज़ाइन किया गया है।किट में नमूना संग्रह, आरएनए और पीसीआर प्रवर्धन की प्रक्रिया की निगरानी करने के लिए एक अंतर्जात आंतरिक नियंत्रण पहचान प्रणाली (CY5 के साथ लेबल की गई आंतरिक नियंत्रण जीन जांच) भी शामिल है, जिससे झूठे नकारात्मक परिणामों को कम किया जा सकता है।
प्रमुख तत्व
| अवयव | आयतन（48टी/किट） |
| आरटी-पीसीआर प्रतिक्रिया समाधान | 96μl |
| nCOV प्राइमर टाकमैन प्रोबमिक्सचर (ORF1ab, N Gene, RnaseP Gene) | 864μl |
| नकारात्मक नियंत्रण | 1500μl |
| एनसीओवी सकारात्मक नियंत्रण (एल ओआरएफ1एबी एन जीन) | 1500μl |
स्वयं के अभिकर्मक: आरएनए निष्कर्षण या शुद्धिकरण अभिकर्मक।नकारात्मक/सकारात्मक नियंत्रण: सकारात्मक नियंत्रण आरएनए होता है जिसमें लक्ष्य अंश होता है, जबकि नकारात्मक नियंत्रण न्यूक्लिक एसिड मुक्त पानी होता है।उपयोग के दौरान, उन्हें निष्कर्षण में भाग लेना चाहिए और उन्हें संक्रामक माना जाना चाहिए।उन्हें प्रासंगिक नियमों के अनुसार संभाला और निपटाया जाना चाहिए।
आंतरिक संदर्भ जीन मानव RnaseP जीन है।
भंडारण की स्थिति और समाप्ति तिथि
-20 ± 5 ℃, बार-बार ठंड से बचें और 5 बार से अधिक पिघलना, 6 महीने के लिए वैध।
लागू साधन
FAM / HEX / CY5 और अन्य मल्टी-चैनल फ्लोरोसेंट पीसीआर इंस्ट्रूमेंट के साथ।
नमूना आवश्यकताओं
1. लागू नमूना प्रकार: गले की खराबी, नासॉफिरिन्जियल स्वैब, ब्रोन्कोएल्वियोलर लवेज द्रव, थूक।
2. नमूना संग्रह (सड़न रोकनेवाला तकनीक)
ग्रसनी स्वाब: टॉन्सिल और पीछे की ग्रसनी दीवार को एक ही समय में दो स्वैब से पोंछें, फिर नमूना समाधान वाले टेस्ट ट्यूब में स्वाब सिर को विसर्जित करें
थूक: रोगी को गहरी खांसी होने के बाद, खाँसी वाले थूक को स्क्रू कैप टेस्ट ट्यूब में नमूना समाधान के साथ इकट्ठा करें;ब्रोंकोएल्वियोलर लवेज द्रव: चिकित्सा पेशेवरों द्वारा नमूनाकरण।3. नमूनों का भंडारण और परिवहन
वायरस अलगाव और आरएनए परीक्षण के लिए नमूनों का जल्द से जल्द परीक्षण किया जाना चाहिए।जिन नमूनों का 24 घंटे के भीतर पता लगाया जा सकता है उन्हें 4 ℃ पर संग्रहीत किया जा सकता है;जिनका 24 के भीतर पता नहीं लगाया जा सकता है
घंटे -70 ℃ या नीचे संग्रहित किया जाना चाहिए (यदि -70 ℃ की भंडारण की स्थिति नहीं है, तो उन्हें होना चाहिए
अस्थायी रूप से -20 ℃ रेफ्रिजरेटर में संग्रहीत)।नमूनों को परिवहन के दौरान बार-बार जमने और पिघलने से बचना चाहिए।संग्रह के बाद नमूनों को जल्द से जल्द प्रयोगशाला भेजा जाना चाहिए।यदि नमूनों को लंबी दूरी पर ले जाने की आवश्यकता है, तो सूखी बर्फ के भंडारण की सिफारिश की जाती है।
परीक्षण विधियाँ
1 नमूना प्रसंस्करण और आरएनए निष्कर्षण (नमूना प्रसंस्करण क्षेत्र)
आरएनए निष्कर्षण के लिए 200μl तरल नमूना लेने की सिफारिश की जाती है।संबंधित निष्कर्षण चरणों के लिए, वाणिज्यिक आरएनए निष्कर्षण किट के निर्देशों का संदर्भ लें।नकारात्मक और नकारात्मक दोनों
इस किट में नियंत्रण निष्कर्षण में शामिल थे।
2 पीसीआर अभिकर्मक तैयारी (अभिकर्मक तैयारी क्षेत्र)
2.1 किट से सभी घटकों को निकालें और पिघलाएं और कमरे के तापमान पर मिलाएं।उपयोग से पहले कुछ सेकंड के लिए 8,000 आरपीएम पर सेंट्रीफ्यूज करें;अभिकर्मकों की आवश्यक मात्रा की गणना करें, और प्रतिक्रिया प्रणाली तैयार की जाती है जैसा कि निम्न तालिका में दिखाया गया है:
| अवयव | एन सर्विंग (25µl सिस्टम) |
| nCOV प्राइमर टाकमैन प्रोबमिक्सचर | 18 μl × एन |
| आरटी-पीसीआर प्रतिक्रिया समाधान | 2 μl × एन |
| *N = जांचे गए नमूनों की संख्या + 1 (नकारात्मक नियंत्रण) + 1 (nCOVसकारात्मक नियंत्रण) | |
2.2 घटकों को अच्छी तरह से मिलाने के बाद, ट्यूब की दीवार पर सभी तरल को ट्यूब के नीचे गिरने देने के लिए थोड़े समय के लिए सेंट्रीफ्यूज करें, और फिर पीसीआर ट्यूब में 20 μl प्रवर्धन प्रणाली को विभाज्य करें।
3 नमूनाकरण (नमूना तैयार करने का क्षेत्र)
निष्कर्षण के बाद नकारात्मक और सकारात्मक नियंत्रणों में से 5μl जोड़ें।परीक्षण किए जाने वाले नमूने का आरएनए पीसीआर रिएक्शन ट्यूब में जोड़ा जाता है।
प्रवर्धन पहचान क्षेत्र में स्थानांतरित करने से पहले ट्यूब को कसकर कैप करें और कुछ सेकंड के लिए 8,000 आरपीएम पर सेंट्रीफ्यूज करें।
4 पीसीआर प्रवर्धन (प्रवर्धित पहचान क्षेत्र)
4.1 प्रतिक्रिया ट्यूब को उपकरण के नमूना सेल में रखें, और निम्नानुसार पैरामीटर सेट करें:
| अवस्था | चक्र संख्या | तापमान(डिग्री सेल्सियस) | समय | संग्रहसाइट |
| उलटनाTRANSCRIPTION | 1 | 42 | दस मिनट | - |
| पूर्व विकृतीकरणn | 1 | 95 | 1 मिनट | - |
| चक्र | 45 | 95 | 15s | - |
| 60 | 30s | डेटा संग्रहण |
साधन पहचान चैनल चयन: प्रतिदीप्ति संकेत के लिए FAM、HEX、CY5 चैनल का चयन करें।फ्लोरोसेंट NONE संदर्भ के लिए, कृपया ROX का चयन न करें।
5 परिणाम विश्लेषण (कृपया सेटिंग के लिए प्रत्येक साधन के प्रयोगात्मक निर्देश देखें)
प्रतिक्रिया के बाद, परिणाम सहेजें।विश्लेषण के बाद, छवि के अनुसार प्रारंभिक मूल्य, समाप्ति मूल्य और आधार रेखा के दहलीज मूल्य को समायोजित करें (उपयोगकर्ता वास्तविक स्थिति के अनुसार समायोजित कर सकते हैं, प्रारंभिक मूल्य 3 ~ 15 पर सेट किया जा सकता है, अंत मूल्य को सेट किया जा सकता है) 5 ~ 20, समायोजन) लॉगरिदमिक ग्राफ में विंडो की दहलीज पर, थ्रेशोल्ड लाइन लॉगरिदमिक चरण में है, और नकारात्मक नियंत्रण का प्रवर्धन वक्र एक सीधी रेखा या थ्रेशोल्ड लाइन के नीचे है)।
6 क्वाटी नियंत्रण (एक प्रक्रियात्मक नियंत्रण परीक्षण में शामिल है) नकारात्मक नियंत्रण: FAM, HEX, CY5 डिटेक्शन चैनलों के लिए कोई स्पष्ट प्रवर्धन वक्र नहीं
COV सकारात्मक नियंत्रण: FAM और HEX डिटेक्शन चैनलों का स्पष्ट प्रवर्धन वक्र, सीटी मान≤32, लेकिन CY5 चैनल का कोई प्रवर्धन वक्र नहीं;
उपरोक्त आवश्यकताओं को एक ही प्रयोग में एक साथ पूरा किया जाना चाहिए;अन्यथा, प्रयोग अमान्य है और उसे दोहराने की आवश्यकता है।
7 परिणामों का निर्धारण।
7.1 यदि परीक्षण नमूने के FAM और HEX चैनलों में कोई प्रवर्धन वक्र या सीटी मान> 40 नहीं है, और CY5 चैनल में एक प्रवर्धन वक्र है, तो यह आंका जा सकता है कि कोई 2019 नया कोरोनावायरस (2019-nCoV) नहीं है। नमूने में आरएनए;
.2 यदि परीक्षण नमूने में FAM और HEX चैनलों में स्पष्ट प्रवर्धन वक्र हैं, और सीटी मान ≤40 है, तो यह अनुमान लगाया जा सकता है कि नमूना 2019 के नए कोरोनावायरस (2019-nCoV) के लिए सकारात्मक है।
7.3 यदि परीक्षण नमूने में केवल FAM या HEX के एक चैनल में स्पष्ट प्रवर्धन वक्र है, और सीटी मान ≤40 है, और अन्य चैनल में कोई प्रवर्धन वक्र नहीं है, तो परिणामों को फिर से जाँचने की आवश्यकता है।यदि पुन: परीक्षण के परिणाम सुसंगत हैं, तो नमूने को नए के लिए सकारात्मक माना जा सकता है
कोरोनावायरस 2019 (2019-nCoV)।यदि पुन: परीक्षण का परिणाम नकारात्मक है, तो यह आंका जा सकता है कि नमूना 2019 नए कोरोनावायरस (2019-nCoV) के लिए नकारात्मक है।
सकारात्मक निर्णय मूल्य
किट के संदर्भ सीटी मान को निर्धारित करने के लिए आरओसी वक्र विधि का उपयोग किया जाता है और आंतरिक नियंत्रण संदर्भ मूल्य 40 है।
परीक्षण के परिणामों की व्याख्या
1. प्रत्येक प्रयोग का नकारात्मक और सकारात्मक नियंत्रणों के लिए परीक्षण किया जाना चाहिए।परीक्षण के परिणाम केवल तभी निर्धारित किए जा सकते हैं जब नियंत्रण गुणवत्ता नियंत्रण आवश्यकताओं को पूरा करते हैं
2. जब FAM और HEX डिटेक्शन चैनल सकारात्मक होते हैं, तो सिस्टम प्रतिस्पर्धा के कारण CY5 चैनल (आंतरिक नियंत्रण चैनल) का परिणाम नकारात्मक हो सकता है।
3. जब आंतरिक नियंत्रण परिणाम नकारात्मक होता है, यदि टेस्ट ट्यूब के FAM और HEX डिटेक्शन चैनल भी नकारात्मक होते हैं, तो इसका मतलब है कि सिस्टम अक्षम है या ऑपरेशन गलत है, परीक्षण अमान्य है।इसलिए सैंपल की दोबारा जांच की जानी चाहिए।
